巨噬細胞清除ClodronateLiposomes氯膦酸二鈉脂質體巨噬細胞清除劑

產品簡介：

清除巨噬細(xi)胞(bao)(depletion of macrophages)是研究巨噬細(xi)胞(bao)功能(neng)的(de)(de)重(zhong)要方法(fa)。荷蘭(lan)阿姆(mu)斯特(te)丹Vrije University 的(de)(de)Nico van Rooijen教授開發的(de)(de)一(yi)款Clodronate Liposomes，可以利(li)用巨噬細(xi)胞(bao)的(de)(de)內(nei)吞機(ji)制，將脂質體包(bao)裹的(de)(de)膜(mo)不通透性的(de)(de)氯磷酸(clodronate)帶入(ru)細(xi)胞(bao)內(nei)，利(li)用“特(te)洛伊木馬(ma)機(ji)制"從而達(da)到去除巨噬細(xi)胞(bao)的(de)(de)目(mu)的(de)(de)。

作用原理:

兩(liang)親(qin)性磷(lin)(lin)脂(zhi)(zhi)(zhi)分(fen)子(zi)在(zai)(zai)(zai)水中(zhong)可(ke)(ke)以形成同心圓形式的(de)(de)磷(lin)(lin)脂(zhi)(zhi)(zhi)雙(shuang)(shuang)(shuang)分(fen)子(zi)層(ceng)(ceng)球體(ti)，磷(lin)(lin)脂(zhi)(zhi)(zhi)雙(shuang)(shuang)(shuang)分(fen)子(zi)層(ceng)(ceng)中(zhong)間(jian)通過水相(xiang)分(fen)隔。溶(rong)解在(zai)(zai)(zai)水溶(rong)液中(zhong)的(de)(de)氯磷(lin)(lin)酸鹽在(zai)(zai)(zai)形成脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)體(ti)的(de)(de)過程(cheng)中(zhong)被包(bao)裹進(jin)磷(lin)(lin)脂(zhi)(zhi)(zhi)雙(shuang)(shuang)(shuang)分(fen)子(zi)層(ceng)(ceng)之間(jian)的(de)(de)水相(xiang)中(zhong)(如圖1)。游離的(de)(de)氯磷(lin)(lin)酸鹽不能自(zi)由的(de)(de)通過脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)體(ti)的(de)(de)磷(lin)(lin)脂(zhi)(zhi)(zhi)雙(shuang)(shuang)(shuang)分(fen)子(zi)層(ceng)(ceng)。隨著脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)體(ti)被巨噬細(xi)(xi)胞(bao)吞噬，在(zai)(zai)(zai)巨噬細(xi)(xi)胞(bao)溶(rong)酶體(ti)磷(lin)(lin)酸酶的(de)(de)作用下，溶(rong)解在(zai)(zai)(zai)脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)體(ti)水相(xiang)中(zhong)的(de)(de)氯磷(lin)(lin)酸鹽就可(ke)(ke)以被逐步釋放出(chu)來(lai)，并累(lei)積在(zai)(zai)(zai)細(xi)(xi)胞(bao)內，當其達(da)到(dao)一定濃度(du)時(shi)，巨噬細(xi)(xi)胞(bao)將會(hui)受到(dao)不可(ke)(ke)逆轉(zhuan)的(de)(de)損傷，從(cong)而進(jin)入凋亡(wang)過程(cheng)。從(cong)死亡(wang)的(de)(de)巨噬細(xi)(xi)胞(bao)中(zhong)釋放出(chu)來(lai)的(de)(de)氯磷(lin)(lin)酸鹽在(zai)(zai)(zai)細(xi)(xi)胞(bao)外(wai)的(de)(de)半(ban)衰期極短(大(da)約15min)，可(ke)(ke)以通過泌尿系統排(pai)除體(ti)外(wai)。

CLODRONATE LIPOSOMES

氯膦(lin)酸鹽脂質(zhi)體

SKU: C-005

Category: Liposomal formulations

clodronateliposomes脂質體C-005構(gou)成：

氯膦酸鹽脂質體：

由(you)同心磷(lin)脂雙層(ceng)構成(cheng)的人造(zao)球，該(gai)雙層(ceng)包裹著含有氯膦(lin)酸鹽的PBS（磷(lin)酸鹽緩沖液(ye)）水溶液(ye)。脂質體是顆粒，大小大。3微米。它們在PBS中形成(cheng)懸(xuan)(xuan)浮(fu)液(ye)，在儲存時會(hui)沉淀(dian)，在試管或(huo)燒瓶的底部形成(cheng)沉淀(dian)。在對實驗動物(wu)給藥之(zhi)前，應先(xian)搖晃(huang)懸(xuan)(xuan)浮(fu)液(ye)，以回收均勻的懸(xuan)(xuan)浮(fu)液(ye)。

對照脂質體（PBS）：

對(dui)照脂質體(ti)不含(han)氯膦(lin)酸鹽(yan)。它們僅含(han)有PBS，可用于對(dui)照實(shi)驗(yan)，以查(cha)明注射氯膦(lin)酸鹽(yan)脂質體(ti)后觀察到的(de)效果是否僅是由于巨噬(shi)細胞耗(hao)竭所致。

clodronateliposomes脂質體C-005產品描(miao)述

磷(lin)脂(zhi)雙(shuang)層由磷(lin)脂(zhi)酰膽(dan)堿和膽(dan)固醇組成。將所有(you)脂(zhi)質體制劑懸(xuan)浮在無菌磷(lin)酸鹽(yan)(yan)緩(huan)沖(chong)鹽(yan)(yan)水（PBS）中：

– 10 mM的Na2HPO4；

– 10毫米NaH2PO4；

– 140毫米氯化鈉(na)。

我們所有(you)的(de)脂(zhi)質(zhi)(zhi)體均帶負電荷，因此不會一起阻塞。懸(xuan)浮液中的(de)脂(zhi)質(zhi)(zhi)體沒有(you)大(da)小(xiao)，這(zhe)意味著(zhu)它也(ye)包含越來越大(da)的(de)脂(zhi)質(zhi)(zhi)體（大(da)3微米）。平均而(er)言，脂(zhi)質(zhi)(zhi)體的(de)大(da)小(xiao)為(wei)1.7微米。

氯(lv)(lv)膦(lin)(lin)酸(suan)鹽(yan)(yan)脂(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)體：人工(gong)制備的脂(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)囊泡(pao)(pao)的懸浮液，包裹(guo)了(le)氯(lv)(lv)膦(lin)(lin)酸(suan)鹽(yan)(yan)。懸浮液中氯(lv)(lv)膦(lin)(lin)酸(suan)鹽(yan)(yan)的濃度(du)約為(wei)。5毫克/毫升 氯(lv)(lv)膦(lin)(lin)酸(suan)鹽(yan)(yan)以CH2Na2Cl2O6P2·5 H2O的形式封裝在脂(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)體囊泡(pao)(pao)中。

PBS脂質(zhi)體：人工制備(bei)的(de)脂質(zhi)囊泡的(de)懸浮(fu)液，其(qi)中包(bao)裹了(le)PBS水(shui)溶(rong)液。這些不(bu)含氯膦酸鹽，可用于對照實驗。

熒(ying)光DiI脂質體(ti)：人工制備的(de)(de)脂質囊泡的(de)(de)懸浮(fu)液，其中包封了PBS水溶液，并用(yong)熒(ying)光染料DiI標記。它們不含氯膦酸鹽，可用(yong)于(yu)研(yan)究(jiu)通過特定給藥(yao)途(tu)徑注射的(de)(de)脂質體(ti)是否能夠到達要研(yan)究(jiu)的(de)(de)巨噬細胞。

儲存和使用說明

到(dao)達脂(zhi)質體(ti)后，應將(jiang)其儲存在(zai)4 – 8oC（或39 – 47oF）之間。脂(zhi)質體(ti)懸(xuan)浮液不得(de)冷(leng)凍，也不要暴露于高溫下。這可能會對磷脂(zhi)雙層造(zao)成干擾，可能導致氯膦(lin)酸鹽從脂(zhi)質體(ti)中泄(xie)漏出來。

給(gei)藥(yao)前，首先使(shi)脂質(zhi)體(ti)(ti)達到室溫，然后(hou)輕輕搖動或攪拌懸浮液(ye)。一段時間后(hou)，脂質(zhi)體(ti)(ti)易于沉淀，導致小(xiao)瓶(ping)中的(de)分布不(bu)均勻。當注(zhu)射花(hua)費太多(duo)時間時，脂質(zhi)體(ti)(ti)甚至可(ke)能(neng)在注(zhu)射器中沉淀。如果使(shi)用同一注(zhu)射器注(zhu)射多(duo)只動物，可(ke)能(neng)會導致劑量不(bu)同。

不建議稀釋(shi)懸浮液(ye)，但如有必要，請使(shi)用PBS或鹽水。

我們(men)建議(yi)客戶在(zai)發(fa)貨后16周內使用脂(zhi)質體制劑。強烈建議(yi)不要在(zai)到期(qi)日期(qi)之(zhi)后使用。在(zai)此期(qi)間(jian)之(zhi)后，污染(ran)的(de)風險會增加(jia)，并且可能(neng)會發(fa)生(sheng)輕(qing)微的(de)功能(neng)喪失。

作用機理

巨(ju)(ju)噬細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)在(zai)免疫(yi)和(he)(he)(he)非免疫(yi)防御(yu)機制中(zhong)起(qi)重要作用(yong)。它(ta)們(men)是(shi)抵御(yu)滲透到脊椎動物體(ti)內的(de)(de)(de)(de)細(xi)(xi)(xi)菌，病(bing)毒和(he)(he)(he)其他(ta)形式(shi)的(de)(de)(de)(de)微生(sheng)(sheng)物污染的(de)(de)(de)(de)首(shou)道防線。巨(ju)(ju)噬細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)是(shi)大型(xing)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，幾乎存在(zai)于所有身體(ti)組織(zhi)中(zhong)，它(ta)們(men)可以具有不同(tong)的(de)(de)(de)(de)形式(shi)和(he)(he)(he)名稱（例如庫普弗細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，肺泡巨(ju)(ju)噬細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，小膠質(zhi)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，破骨細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，紅髓巨(ju)(ju)噬細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)）。巨(ju)(ju)噬細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)“清除(chu)"，它(ta)們(men)攝(she)入并消化(hua)可能是(shi)潛在(zai)病(bing)原(yuan)體(ti)的(de)(de)(de)(de)所有異物，微生(sheng)(sheng)物，癌細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)和(he)(he)(he)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)碎片(pian)。該過程稱為吞噬作用(yong)。巨(ju)(ju)噬細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)主(zhu)要通過可溶性(xing)分(fen)子如細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)因子和(he)(he)(he)趨化(hua)因子的(de)(de)(de)(de)介導來進(jin)一步(bu)調節許多非吞噬細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)(de)(de)(de)功能。他(ta)們(men)參與先天免疫(yi)，

脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)體(ti)(ti)(ti)是人工制備的球體(ti)(ti)(ti)，由同心磷脂(zhi)(zhi)(zhi)雙(shuang)(shuang)層(ceng)組(zu)成(cheng)。當磷脂(zhi)(zhi)(zhi)分(fen)散(san)在水(shui)中(zhong)時(shi)，親水(shui)性(xing)(xing)頭(tou)部(bu)(bu)將(jiang)構成(cheng)脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)體(ti)(ti)(ti)的兩個外(wai)部(bu)(bu)部(bu)(bu)分(fen)，而疏水(shui)性(xing)(xing)脂(zhi)(zhi)(zhi)肪(fang)酸(suan)基團將(jiang)構成(cheng)內(nei)部(bu)(bu)部(bu)(bu)分(fen)（見圖1）。水(shui)室分(fen)隔雙(shuang)(shuang)層(ceng)，親水(shui)分(fen)子(zi)可以溶解在其中(zhong)，形成(cheng)脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)體(ti)(ti)(ti)包封的分(fen)子(zi)。氯(lv)(lv)(lv)膦(lin)酸(suan)鹽(yan)（二氯(lv)(lv)(lv)亞甲基雙(shuang)(shuang)膦(lin)酸(suan)酯或Cl2MBP）是一種親水(shui)性(xing)(xing)分(fen)子(zi)，可以封裝(zhuang)在磷脂(zhi)(zhi)(zhi)雙(shuang)(shuang)層(ceng)中(zhong)。游離氯(lv)(lv)(lv)膦(lin)酸(suan)鹽(yan)不易穿過(guo)細(xi)胞(bao)(bao)膜，并通過(guo)腎臟系統(tong)從(cong)循環中(zhong)迅速清除（即數分(fen)鐘內(nei)）。但是，氯(lv)(lv)(lv)膦(lin)酸(suan)鹽(yan)脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)體(ti)(ti)(ti)包埋(mai)在脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)體(ti)(ti)(ti)中(zhong)時(shi)，會被(bei)巨(ju)(ju)噬(shi)細(xi)胞(bao)(bao)吞噬(shi)，無法逃脫（見圖2）。磷脂(zhi)(zhi)(zhi)雙(shuang)(shuang)層(ceng)被(bei)溶酶(mei)體(ti)(ti)(ti)磷脂(zhi)(zhi)(zhi)酶(mei)消(xiao)化，而氯(lv)(lv)(lv)膦(lin)酸(suan)鹽(yan)未被(bei)消(xiao)化并且保(bao)留在巨(ju)(ju)噬(shi)細(xi)胞(bao)(bao)中(zhong)。巨(ju)(ju)噬(shi)細(xi)胞(bao)(bao)攝(she)入的磷脂(zhi)(zhi)(zhi)雙(shuang)(shuang)層(ceng)和脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)體(ti)(ti)(ti)越多，在巨(ju)(ju)噬(shi)細(xi)胞(bao)(bao)內(nei)積累(lei)的氯(lv)(lv)(lv)膦(lin)酸(suan)鹽(yan)越多。超過(guo)一定的細(xi)胞(bao)(bao)內(nei)濃度(du)，氯(lv)(lv)(lv)膦(lin)酸(suan)鹽(yan)將(jiang)通過(guo)啟(qi)動(dong)程序性(xing)(xing)細(xi)胞(bao)(bao)死亡（即凋亡）來消(xiao)除巨(ju)(ju)噬(shi)細(xi)胞(bao)(bao)。

圖(tu)1.氯(lv)膦酸鹽脂(zhi)質體的示(shi)意圖(tu)。囊泡由同心的磷脂(zhi)雙(shuang)(shuang)層構成，被水性隔室隔開。雙(shuang)(shuang)層由親水和疏水基團組成。將氯(lv)膦酸鹽（在此以黑色方塊表示(shi)）溶(rong)解在水溶(rong)液中并封(feng)裝在脂(zhi)質體內。

圖2.巨(ju)噬(shi)(shi)細(xi)胞對(dui)氯膦(lin)酸鹽脂(zhi)(zhi)質體(ti)的(de)(de)攝取和消化(hua)示意圖。巨(ju)噬(shi)(shi)細(xi)胞通過胞吞作(zuo)用(yong)攝入氯膦(lin)酸鹽脂(zhi)(zhi)質體(ti)，然(ran)后與含(han)有磷脂(zhi)(zhi)酶(mei)(mei)的(de)(de)溶酶(mei)(mei)體(ti)（L）融(rong)合（箭頭）。磷脂(zhi)(zhi)酶(mei)(mei)破壞的(de)(de)磷脂(zhi)(zhi)雙層越多(duo)，在巨(ju)噬(shi)(shi)細(xi)胞內(nei)釋放(fang)的(de)(de)氯膦(lin)酸鹽（黑(hei)色(se)方塊）越多(duo)。巨(ju)噬(shi)(shi)細(xi)胞終通過凋(diao)亡被(bei)殺死。（N =巨(ju)噬(shi)(shi)細(xi)胞核）。

因此，氯(lv)膦酸(suan)鹽脂(zhi)(zhi)質體可(ke)(ke)用于通過(guo)消耗(hao)(hao)巨噬細(xi)胞(bao)來研(yan)究(jiu)巨噬細(xi)胞(bao)功(gong)能。例如，它們可(ke)(ke)以(yi)應用于各種自身免疫性(xing)疾(ji)病，移植(zhi)，神經系統疾(ji)病和基因治療的(de)(de)模型。氯(lv)膦酸(suan)鹽脂(zhi)(zhi)質體只有(you)在可(ke)(ke)以(yi)達(da)到的(de)(de)情況下才能耗(hao)(hao)盡巨噬細(xi)胞(bao)。一些(xie)組織可(ke)(ke)以(yi)形(xing)成脂(zhi)(zhi)質體的(de)(de)屏障。通過(guo)選擇氯(lv)膦酸(suan)鹽脂(zhi)(zhi)質體的(de)(de)正確給藥(yao)途徑(jing)，可(ke)(ke)以(yi)耗(hao)(hao)盡特定的(de)(de)器官或組織的(de)(de)巨噬細(xi)胞(bao)。有(you)關管理協議(yi)的(de)(de)更(geng)多信息，請單(dan)擊此處。

PBS脂(zhi)(zhi)質體(ti)主要用(yong)于(yu)對(dui)照實驗(yan)。但是，這些也可以在某些時間段內通過飽和來阻止吞噬作用(yong)。因(yin)(yin)此，PBS脂(zhi)(zhi)質體(ti)不能代表正常健康的，未(wei)阻斷的，未(wei)抑制的和未(wei)活化(hua)的巨噬細胞的對(dui)照實驗(yan)。當比較氯膦酸鹽(yan)脂(zhi)(zhi)質體(ti)和PBS脂(zhi)(zhi)質體(ti)的作用(yong)時，其作用(yong)因(yin)(yin)此可能小于(yu)預期。

有關更多信息，請參(can)見：

– Van Rooijen，N.和(he)Sanders，A.（1994）。脂質體介導的巨噬細胞耗竭(jie)：作用機理，脂質體制備和(he)應用。免疫(yi)學雜(za)志(zhi)，174（1-2），83-93。

– Van Rooijen，N.，Sanders，A.和van den Berg，TK（1996）。脂質體介(jie)導的氯膦(lin)酸鹽和丙am的細(xi)胞內遞送(song)誘導的巨噬細(xi)胞凋亡。免(mian)疫學雜志，193（1），93-99。

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