細胞(bao)培養(yang)類型可(ke)以分為貼壁細胞(bao)和(he)懸(xuan)浮(fu)細胞(bao)兩種(zhong)，只有極少數類型細胞(bao)同時存在兩種(zhong)狀態。
懸(xuan)(xuan)浮細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)是(shi)指(zhi)不(bu)(bu)需要(yao)依賴支(zhi)持物，可在(zai)培(pei)(pei)養(yang)(yang)基中(zhong)以(yi)懸(xuan)(xuan)浮狀態生(sheng)長(chang)的(de)(de)一類細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，如淋巴細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)和大部分血(xue)液系(xi)統來(lai)源(yuan)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)。（如小鼠(shu)白血(xue)病細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)WEHI-3, 人(ren)白血(xue)病細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)K-562, HL-60）。工(gong)業(ye)上也(ye)有(you)越來(lai)越多的(de)(de)貼壁傳代細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)被馴化(hua)出來(lai)，進行(xing)全(quan)懸(xuan)(xuan)浮的(de)(de)培(pei)(pei)養(yang)(yang)。目(mu)前(qian)在(zai)工(gong)業(ye)中(zhong)應用(yong)的(de)(de)主(zhu)要(yao)有(you)SP2/0、NS0、CHO、BHK和HEK293細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)等(deng)，它們主(zhu)要(yao)用(yong)于重組蛋(dan)白質(zhi)生(sheng)產；在(zai)獸用(yong)生(sheng)物制品中(zhong)常用(yong)的(de)(de)傳代細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)主(zhu)要(yao)有(you)采用(yong)全(quan)懸(xuan)(xuan)浮培(pei)(pei)養(yang)(yang)的(de)(de)BHK21細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)、MDCK細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)；及借助微載體懸(xuan)(xuan)浮培(pei)(pei)養(yang)(yang)的(de)(de)Vero細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)、PK細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)、ST細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)、 Marc145細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)等(deng)，每種細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)特性(xing)都不(bu)(bu)同。
一(yi)般情況下，懸浮(fu)(fu)細胞(bao)相較于貼壁細胞(bao)的處理更加簡單一(yi)些，因為懸浮(fu)(fu)細胞(bao)傳(chuan)(chuan)代時無須胰(yi)酶消(xiao)化。但這(zhe)并(bing)不意味著懸浮(fu)(fu)細胞(bao)比貼壁細胞(bao)好養，對新手(shou)來說(shuo)，反而更具挑戰性。總(zong)是會遇(yu)到各(ge)種(zhong)各(ge)樣的問(wen)題(ti)：比如，為什么總(zong)是出現(xian)死細胞(bao)和(he)細胞(bao)分(fen)化；說(shuo)好了(le)傳(chuan)(chuan)代很(hen)easy的，結果會出現(xian)分(fen)化；養好了(le)凍存(cun)復(fu)蘇后又(you)出現(xian)問(wen)題(ti)了(le)！
養(yang)好懸浮細胞，有(you)如下大眾經驗分享。
要點一：足夠的耐心，這是非常必要的
很多(duo)懸浮細胞(bao)(bao)(bao)在(zai)剛從(cong)凍(dong)存狀態復(fu)(fu)蘇時(shi)活力是相對較差的(de)(de)，此時(shi)我們需要(yao)(yao)有(you)足夠(gou)的(de)(de)耐(nai)心，等待細胞(bao)(bao)(bao)完(wan)成自我修復(fu)(fu)進(jin)入對數增長期(qi)。比如THP-1（人(ren)(ren)單核(he)細胞(bao)(bao)(bao)白血病）從(cong)解凍(dong)到恢復(fu)(fu)正常增殖往(wang)往(wang)需要(yao)(yao)7-10天的(de)(de)恢復(fu)(fu)期(qi)；Jurkat，Clone E6-1(人(ren)(ren)T淋巴細胞(bao)(bao)(bao)白血病細胞(bao)(bao)(bao))復(fu)(fu)蘇后(hou)也需要(yao)(yao)5-7天才(cai)能恢復(fu)(fu)到凍(dong)存前的(de)(de)狀態。新手可能會在(zai)此期(qi)間放棄培養(yang)，所以，請多(duo)一(yi)點耐(nai)心哦！培養(yang)這類細胞(bao)(bao)(bao)也是培養(yang)耐(nai)心的(de)(de)過程呢！
要點二：接種密度的把握
一(yi)般來說，懸浮細(xi)胞(bao)(bao)接種時密(mi)度不(bu)應(ying)低于50萬個(ge)/ML，很(hen)多懸浮細(xi)胞(bao)(bao)有(you)密(mi)度依賴，密(mi)度低導致的不(bu)增殖也是新手常見問(wen)題之(zhi)一(yi)。當然(ran)，有(you)極少數細(xi)胞(bao)(bao)在密(mi)度高時反(fan)而狀態變差，如W6/32（小鼠B細(xi)胞(bao)(bao)雜(za)交瘤細(xi)胞(bao)(bao)）。因(yin)此，培養(yang)不(bu)了(le)解的細(xi)胞(bao)(bao)前查找相(xiang)關資料去掌握細(xi)胞(bao)(bao)特性非常重(zhong)要。
要點三：換液方法及頻率
換(huan)液頻(pin)率不應(ying)該被限制(zhi)得“明明白白"，細(xi)胞(bao)(bao)是活物，在一(yi)個(ge)連續培(pei)養(yang)周期內，視細(xi)胞(bao)(bao)生(sheng)長狀態可分多次添加(jia)補(bu)充培(pei)養(yang)基、葡萄糖等特定營(ying)養(yang)成份，維(wei)持(chi)細(xi)胞(bao)(bao)良(liang)好(hao)的(de)生(sheng)長狀態。懸浮培(pei)養(yang)過程中(zhong)(zhong)，隨著細(xi)胞(bao)(bao)的(de)增殖，原有培(pei)養(yang)基中(zhong)(zhong)營(ying)養(yang)物質的(de)消耗，代謝產物的(de)增加(jia)，細(xi)胞(bao)(bao)的(de)活率會下降，及時補(bu)充營(ying)養(yang)物質，使細(xi)胞(bao)(bao)處于一(yi)個(ge)相對良(liang)好(hao)的(de)生(sheng)存環境。切(qie)忌(ji)頻(pin)繁離心(xin)換(huan)液。參考(kao)換(huan)液方(fang)法：
①離心全(quan)換(huan)液法
即通(tong)過離心（800-1000rpm，5min）去除(chu)全部舊的(de)(de)培養基，更換新鮮(xian)培養基。該(gai)方(fang)法適合“皮實“好養的(de)(de)懸浮(fu)細胞(bao)(bao)換液(ye)(如K562)，或者當(dang)前細胞(bao)(bao)狀態良(liang)好、密度較高導致培養基消耗(hao)較大(da)的(de)(de)情況(kuang)。此(ci)方(fang)法的(de)(de)優點是(shi)換液(ye)到位，能去除(chu)部分細胞(bao)(bao)碎(sui)片，但是(shi)同樣會對細胞(bao)(bao)造成一定程度的(de)(de)機械(xie)損傷。
②離心半換(huan)液法
即(ji)通過離心（800-1000rpm，5min）50%細胞懸(xuan)液，更換50%體積的新鮮培養基。該方法(fa)適合(he)比(bi)較“矯情“難養的細胞（如thp-1），或者正在調(diao)整狀(zhuang)態(tai)中(zhong)、密度較低(di)但碎片較多(duo)需(xu)要去除(chu)的情況。
③沉(chen)降換液法
即不使用離(li)心(xin)機而是(shi)利用重(zhong)力(li)自(zi)然沉降(jiang)的(de)方法(fa)，將培養(yang)基與(yu)細(xi)(xi)胞(bao)分離(li)，達到(dao)全(quan)部或部分更(geng)換(huan)新鮮培養(yang)基。但是(shi)其(qi)有應(ying)用局限(xian)性—只(zhi)適合能(neng)成一定大小細(xi)(xi)胞(bao)團（否(fou)則(ze)無(wu)法(fa)自(zi)然沉降(jiang)，只(zhi)能(neng)低速離(li)心(xin)）的(de)細(xi)(xi)胞(bao)，尤(you)其(qi)是(shi)處理依賴細(xi)(xi)胞(bao)聚集才能(neng)增(zeng)殖的(de)細(xi)(xi)胞(bao)時非常(chang)值得推薦，如NK-92、NK-92 MI、Jurkat。該方法(fa)能(neng)在(zai)換(huan)液過程(cheng)中(zhong)最大限(xian)度避免(mian)離(li)心(xin)過程(cheng)造成的(de)機械(xie)損傷，同時保留聚集的(de)細(xi)(xi)胞(bao)團，并且去除細(xi)(xi)胞(bao)碎片也較為干凈。
固定懸浮細胞，有如下私房經驗分享。
養好懸浮細胞，需要用化合物等試劑刺激懸浮細胞，或者共培養。使用免疫熒光來檢查懸浮細胞，一直給很多新手，甚至高手造成心理陰影。如何固定好懸浮細胞？如何確保不掉片？甚至如何讓懸浮細胞貼壁來做實驗？是很多實驗者的奢望。懸浮細胞固定/免疫熒光專用玻片給帶來解決方案。
如下(xia)是一些懸(xuan)浮細胞(bao)固(gu)定后做的免疫熒光(guang)圖片，可以參考(kao)。
