您是否希(xi)望懸浮細胞(bao)的免疫熒光像貼壁(bi)細胞(bao)一樣容易?現(xian)在就是這(zhe)樣!
靶點科(ke)技Shi-fix玻(bo)片(pian)允許(xu)懸(xuan)浮細胞分(fen)層或直(zhi)接作為(wei)單層生長。簡單,無憂的實驗方案,無需(xu)(xu)離心即可將(jiang)懸(xuan)浮細胞固定(ding)到載玻(bo)片(pian)上。只需(xu)(xu)將(jiang)細胞添加到載玻(bo)片(pian)上,等(deng)待30分(fen)鐘,用PBS洗滌未結合(he)的細胞并繼續(xu)免疫染色(或繼續(xu)培養(yang)以獲得所需(xu)(xu)的細胞密度)。
這些(xie)玻片也可(ke)(ke)(ke)用(yong)于染色懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)以進行顯(xian)微鏡檢查,或用(yong)于固定懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)以進行共聚(ju)焦顯(xian)微鏡檢查。更重要的是,如(ru)果需要,您還可(ke)(ke)(ke)以在(zai)細(xi)胞(bao)附著(zhu)在(zai)玻片上時刺激它們。您可(ke)(ke)(ke)以像貼壁細(xi)胞(bao)一樣處理非貼壁細(xi)胞(bao)!
關鍵步驟:
1. 使用(yong)PBS清洗(xi)細胞(bao),并將細胞(bao)重新懸浮于PBS中(2-5 百萬個/ml)
2. 把懸(xuan)浮細胞(bao)專用免疫(yi)熒光玻片放置(zhi)于12孔或者6孔細胞(bao)培養板孔里,直接滴加細胞(bao)于懸(xuan)浮細胞(bao)專用免疫(yi)熒光玻片上(shang)(每(mei)個玻片上(shang)20-30萬個細胞(bao))
3. 使(shi)細胞(bao)附(fu)著30分鐘(zhong)(zhong),有(you)些細胞(bao)需要延(yan)長附(fu)著時間,但(dan)不要超過(guo)1小(xiao)時。使(shi)用約2ml PBS沖洗掉未結(jie)合細胞(bao)(切勿直(zhi)接垂直(zhi)滴加PBS到(dao)玻片上細胞(bao),可(ke)將PBS滴加于板孔里側邊(bian),然后(hou)輕(qing)輕(qing)搖晃(huang)3-5分鐘(zhong)(zhong))
4. 在顯微鏡下檢(jian)查細胞附著情(qing)況,如果需(xu)要進一(yi)步培養(yang),那么加入1ml培養(yang)基即可;若不培養(yang)即可直接(jie)固定,染色。
四步走(zou),操作(zuo)示意圖如下: