根據細胞培養時是否附著在支持介質上，分為貼壁細胞和懸浮細胞。

貼壁(bi)細胞天生容易(yi)貼(tie)壁，這(zhe)為后續(xu)實(shi)驗提供了便利條件(jian)。

但是懸浮細胞在培養基中懸浮生長，如何像貼壁細胞一樣好操作，一直是大家的夢想。

一 傳統的方法：細胞準備與(yu)固定

（1）單(dan)層生(sheng)長細胞(bao)：取對數生(sheng)長細胞(bao)，用0.25％胰蛋白酶消(xiao)化，制成單細(xi)胞(bao)懸液(ye)。將(jiang)細(xi)胞(bao)接(jie)種到預(yu)先放置幾張6×22mm蓋玻片的培養瓶或(huo)培養(yang)皿中，置二氧(yang)化碳培養(yang)箱培養(yang)1-3天，待細胞接近長成單層，取出蓋玻片，進入PBS（0.01 mol/L,pH7.4）洗2次，然后根據實驗目的，選擇適當固(gu)定劑(ji)固(gu)定細胞。常用固(gu)定劑(ji)有：95％乙醇（固(gu)定時間10-30min），丙酮(tong)（5－10min）等(deng)。

（2) 懸浮(fu)生長(chang)(chang)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)：取對數(shu)生長(chang)(chang)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)，用(yong)PBS離(li)(li)心洗(xi)滌（1000rpm，5min）2次，或(huo)(huo)用(yong)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)離(li)(li)心甩片(pian)機制(zhi)備細(xi)(xi)(xi)胞(bao)片(pian)或(huo)(huo)直接制(zhi)備細(xi)(xi)(xi)胞(bao)涂(tu)片(pian)，把細(xi)(xi)(xi)胞(bao)片(pian)浸(jin)入95％乙醇或(huo)(huo)丙(bing)酮中固(gu)定。

2 將已經(jing)固(gu)定的細(xi)胞(bao)玻片(pian)放入蓋片(pian)染(ran)色缸，用PBS振洗5min，取出吹干。

3 滴加適當稀釋(shi)的特異性抗體，置于(yu)濕盒內，37度保(bao)溫30－60min或度冰箱過夜

4 PBS振洗3次(ci)，每次(ci)5min，吹(chui)干(gan)。

5 滴加(jia)適當稀釋(shi)的熒光素標記抗體(ti)，置于濕盒內，37度(du)保溫30－60min。

6 PBS振(zhen)洗2次，每次5min，然(ran)后用蒸餾水(shui)振(zhen)洗1次。

7 50％緩沖甘油封片。

二 Shi-Fix玻片最新(xin)方法

Shi-Fix玻片，可(ke)以(yi)讓我們像貼壁細胞一樣(yang)對懸浮細胞做免疫熒(ying)光，如(ru)下是使用Shi-Fix做的(de)實(shi)驗(yan)結果。簡(jian)單的(de)四(si)部，告別傳(chuan)統的(de)自(zi)己(ji)涂片，自(zi)己(ji)甩片，自(zi)己(ji)烤片等(deng)作坊式方法。